Microscopes - Microscope multiphoton

Un microscope multiphotonique (en anglais Multi-Photon Laser Scanning Microscope, MPLSM, également appelé multi-photon microscopy, MPM) est un microscope optique spécial appartenant au groupe des microscopes à balayage laser. Les images sont produites en utilisant l’un de deux phénomènes physiques différents : 1. la fluorescence multiphotonique (généralement la fluorescence à deux photons) ou 2. Higher Harmonic Generation (doublement (Second Harmonic Generation, SHG) ou triplement (Third Harmonic Generation, THG) de la fréquence d’oscillation de la lumière émise). À l’aide d’un faisceau laser puissant et focalisé, on produit ainsi des effets optiques non linéaires qui reposent sur l’interaction de plusieurs photons (particules de lumière) arrivant simultanément dans une molécule. L’intensité du signal généré n’augmente donc pas de manière linéaire avec le nombre de photons irradiés, mais avec le carré (pour les effets à deux photons) ou la puissance trois (pour les effets à trois photons). Le mode de fonctionnement d’un microscope multiphotonique est similaire à celui d’un microscope confocal à balayage laser. Toutefois, alors que la microscopie confocale à balayage laser a une profondeur de pénétration de 50-80 µm selon la préparation, la microscopie multiphotonique permet d’atteindre des zones plus profondes, par exemple de 200 µm, voire dans des cas très favorables jusqu’à 1000 µm (=1 mm). Il est ainsi possible de prendre des photos de tissus vivants inaccessibles autrement pour l’imagerie.